Знакомство с Schizophyllum Commune: создание стерильной культуры из найденных грибов: 3 шага (с изображениями)

2024 Автор: John Day | [email protected]. Последнее изменение: 2024-01-30 11:53

Это руководство посвящено объяснению того, как создать стерильную культуру гриба Schizophyllum Commune (обычное название гриба Split Gill) на чашке Петри с использованием найденных грибов. Было обнаружено, что Schizophyllum Commune имеет более 28 000 полов, встречается на всех континентах, кроме Антарктиды, и обладает способностью (как и другие «грибы белой и коричневой гнили») разрушать эндокринные загрязнения (пластмассы, гормоны, имитирующие промышленные нефтехимии, такие как удобрение Атразин, пластификатор Бисфенол-А или синтетический гормон диэтилстильбестрол).

Я расскажу о методах идентификации диких грибов, о том, как сделать чашку Петри с питательным агаром, и о том, как использовать найденные вами грибы для выращивания стерильной изолированной культуры в вашей чашке Петри. Другие инструкции из этой серии посвящены таким методам, как генетическая идентификация грибов, простые ферментативные анализы для проверки способности грибов разрушать пластмассы и имитирующие гормоны загрязнения, а также способы приготовления сыра с S. Commune.

Этот проект появился в результате совместной работы Мэри Мэггич, Паулы Пин и меня во время резидентуры в HANGAR в Барселоне, Испания, осенью сентября 2018 года. Подробнее о проекте читайте на ~~ или пропустите все Bla Bla и сразу переходите к Step 1 за учебник:)

Изображения взяты из журнала Schizophyllum Commune Fanzine ~ файлы можно бесплатно скачать здесь

Во время резиденции нашими тремя основными целями были:

1 ~ Изучите и переварите научную литературу о Schizophyllum Commune и ее различных взаимодействиях с гормонами и нефтехимическими загрязнителями, нарушающими эндокринную систему. S. Commune - один из многих грибов «белой и коричневой гнили», способных разрушать гормональные и эндокринные загрязнения. Эти грибы питаются деревьями, выделяя «лигноцеллюлозные» ферменты из своих сетевых тел или «мицелия», и эти ферменты способны расщеплять целлюлозу и лигнин, из которых состоят деревья. Из-за структурного сходства между целлюлозой, лигнином и EDS '/ гормонами, такими как атразин, BPA, эстрадиол, диэтилстильбестрол и нонилфенолы, «лигноцеллюлозные» ферменты, секретируемые грибами, также могут расщеплять множество токсичных веществ. В дополнение к этому S. Commune производит иммуностимулирующие полисахариды, которые полезны в качестве средств профилактики и лечения рака (одобрены в Японии для лечения рака шейки матки), могут усиливать фитоэстрогенные свойства некоторых растений посредством ферментации, могут использоваться вместо сычужного фермента и лактобактерий в процессы сыроделия и вырабатывают ферменты, растворяющие тромбиновый сгусток (полезны при лечении тромбоза). Как ни странно, те же самые «бета-глюканы», которые можно экстрагировать кипящей водой в качестве лечения рака и иммуностимуляторов, также используются в нефтяной промышленности для увеличения выхода масла, связывая S. Commune в причудливой петле обратной связи с производством эндокринных нарушений. нефтехимия способна к разложению и восстановлению.

2 ~ Разработайте протоколы DIY и DIWO (делайте это вместе с другими), которые упрощают эти способы работы с EDC и грибами, чтобы переводить систематизированные научные знания на более доступный язык. Используйте эти рецепты для обучения, для опроса, для сопротивления молекулярной колонизации и создания новых рассказов о многовидовом становлении и нашем коллективном мутагенезе.

3 ~ Бросьте вызов доминирующему цишетеронормативному, квирфобному дискурсу, связанному с химическими веществами, разрушающими эндокринную систему (EDC). Процитируем стипендию Малин А-Кинг и Евы Хейворд по этим вопросам: «Многие новостные агентства сообщают об этих пугающих эндокринных рассказах с наших задних дворов. Стремясь выдвинуть на первый план эти проблемы - как мы расскажем ниже, - СМИ раскрыли метаморфозу Франкенштейна. которая угрожает сексу и сексуальности. Вместо того, чтобы заниматься многими другими рисками для здоровья, связанными с воздействием токсичных веществ, наиболее сенсационные и полемические вопросы требуют обсуждения и критического ответа. Это вызывает вопросы: почему секс имеет большее значение, чем рак, аутоиммунные заболевания, и даже смерть? Какие культурные нервы (многие из которых глобализированы) срабатывают? И для тех из нас, кто озабочен феминизмом, как мы переориентируем дебаты с эссенциализма, сексизма и гетеронормативности? » (Токсичные полы).

Schizophyllum Commune - это уникальный «гриб белой гнили», в котором было обнаружено более 28 000 генетических полов. Эта адаптация, как предполагают многие, позволила невероятному генетическому разнообразию этого вида, которое существует на всех континентах мира, кроме Антарктиды. Мы хотели отметить прекрасную сексуальную множественность этого организма как один из примеров странности биологии. Доминирующий дискурс, окружающий EDC, в средствах массовой информации и даже среди активистов-экологов в значительной степени сосредоточен на ненаучных рассказах о том, что эти молекулы вызывают определенные сексуальные или гендерные аспекты, которые наше общество патологизирует, называет ненормативными и часто стремится устранить или избежать. Паника по поводу секса, квир-фобия общественного протеста по поводу нереалистичной EDC с научной точки зрения (гормоны и эндокринные разрушители не делают людей гомосексуалистами или трансгендерами) не только нереалистичны, но и игнорируют все разрушительно реальные эффекты, которые мы можем связать с EDC: ожирение, заболевания щитовидной железы, некоторые виды рака и другие риски для здоровья.

Шаг 1. Найдите общину Schizophyllum, живущую в вашем районе

Стерильные культуры Schizophyllum Commune лабораторного класса можно приобрести примерно за 350 долларов в банке микробиологических культур, таком как ATCC… именно поэтому мы выбрали культивирование из диких грибов бесплатно:)

Мне было легко, потому что я читал о Schizophyllum Commune и однажды случайно заметил, что он растет на дереве перед моей квартирой. Если вам не повезло случайно наткнуться на S. Commune в вашем районе, вам нужно отправиться в лесную местность и поискать грибы-скобки, растущие на болезненных лиственных деревьях (деревья, которые выглядят так, будто они этого не делают. слишком хорошо) или упавшие деревья. S. Commune - один из наиболее распространенных существующих грибов во всем мире, и его можно найти практически везде, где есть твердые породы дерева.

Mushroomobserver.org предоставляет прекрасное подробное описание того, где и когда вы, вероятно, найдете S. Commune, а также как его идентифицировать и как избежать "похожих друг на друга", которые могут привести к неправильной идентификации:

ИДЕНТИФИКАЦИЯ: Schizophyllum commune легко идентифицировать по его раздвоенным жабрам, густой шерсти и веерообразной шляпке. Шляпка имеет ширину 1-4,5 см и обычно имеет форму раковины или веера с серой или беловатой поверхностью. Базидиоспоры размером 5-7,5 × 2 -3 мкм. Подобный гриб, известный как «гофрированная жабра» Plicaturopsis crispa, не так широко распространен.

МЕСТО ОБИТАНИЯ: Schizophyllum commune растет на древесине лиственных пород с использованием ферментов, разрушающих лигнин и вызывающих «белую гниль». Так что он встречается практически во всех лесных районах. Его можно встретить круглый год из-за его способности высыхать, регидратироваться в лучших условиях, а затем продолжать спорулировать.

Этот гриб может паразитировать на деревьях небольшого диаметра, которые подвергаются стрессу от других факторов, таких как засуха.

СМОТРИТЕ НА СООТВЕТСТВИЕ: Plicaturopsis crispa или «извитые жабры» похожи на расщепленные жабры. Он также имеет плодовое тело в форме ракушки / веерообразного плода. Однако шляпка красновато-коричневая или желто-коричневая, а нижняя сторона очень характерна. У него есть извитые жабры, похожие на жабры, которые сильно отличаются от расщепленных жабр у Schizophyllum commune. Гофрированная жабра встречается реже, но при обнаружении ее можно отличить ».

Шаг 2: приготовьте чашки с питательным агаром для роста S. Commune

Чтобы изолировать культуру S. Commune, вам понадобится несколько чашек Петри, наполненных пищей для гриба. Агар с солодовым экстрактом - это простой в приготовлении корм для S. Commune или «питательная среда», которая может быть приготовлена из легкодоступных ингредиентов. Это также хороший источник пищи для использования при проведении экспериментов по ферментативному анализу с S. Commune и другими грибами белой или коричневой гнили ~~ этот процесс будет описан в другом руководстве.

ПОБОЧНОЕ ПРИМЕЧАНИЕ: Если у вас возникли проблемы с поиском S. Commune, есть много других грибов в том же семействе, которые можно культивировать с использованием тех же процессов, и они так же хороши, если не лучше, в разложении эндокринных разрушающих загрязнителей. Хвост индейки (Trametes Versicolor) был обнаружен во многих исследованиях, в которых изучались сотни грибов белой и коричневой гнили, которые являются самыми высокими продуцентами «лигноцеллюлозных» ферментов, ухудшающих нефтехимическое загрязнение. Вешенки тоже очень хороши в этом.

Я занимаюсь микробиологической работой в общественной биологической лаборатории под названием BUGSS (Подземное научное пространство Балтимора), где у меня есть доступ к стеклянной посуде, цифровым весам, градуированным цилиндрам, автоклаву (для стерилизации сред теплом и давлением) и т. Д. В таких лабораториях есть возникли по всему миру за последнее десятилетие, поэтому вы можете проверить этот список, чтобы узнать, есть ли поблизости от вас. Если в вашем районе нет такой хорошей общественной лаборатории, вам придется вложить средства в базовое оборудование для этого процесса, например:

1 ~ Цифровая шкала для точного измерения ингредиентов

2 ~ Скороварка для стерилизации ваших материалов с помощью тепла и пара

3 ~ Чашки Петри, их можно купить в Интернете довольно дешево, многоразовые стеклянные или одноразовые пластиковые подойдут, но многоразовые всегда лучше:)

4 ~ Некоторая посуда для смешивания ингредиентов, стерилизации и хранения.

Если вы не хотите вкладывать средства в это оборудование, вы можете найти предварительно разлитые агаровые чашки с экстрактом солода для покупки на таких сайтах, как Amazon ~ это будет просто дороже в долгосрочной перспективе, если вы планируете продолжать заниматься микробиологической работой.

Уже есть много отличных руководств и видеороликов на YouTube о том, как приготовить чашки Петри с питательной средой в домашних условиях. Поэтому вместо того, чтобы вдаваться в подробности, я просто свяжусь с парочкой и предоставлю рецепт агара с 2% экстрактом солода, который является питательной средой, которую вы будете использовать.

Freshcap Musrooms: Руководство по приготовлению агаровых тарелок для выращивания грибов в домашних условиях

Mykoweb: начало выращивания грибов

Технический паспорт агара с солодовым экстрактом

2% агар с солодовым экстрактом (MEA) ~~ Рецепт на 1 литр:

20 г солодового экстракта (обычная поставка для пивоварения, можно приобрести в Интернете)

15 г агара (отвердитель - его часто используют для приготовления пищи, поэтому его можно купить в Интернете или в некоторых продуктовых магазинах)

1 литр H2O (я обычно использую воду обратного осмоса, которую можно купить в большинстве продуктовых магазинов в галлонных кувшинах)

Этот рецепт можно легко изменить, если вы хотите изготавливать меньшее количество. Например, я часто делаю только 250 мл за раз, поэтому я использую только 5 граммов солодового экстракта, 3,75 грамма агара и 250 мл воды.

Шаг 3. Заразите свою чашку Петри грибами

Гриб, который вы видите, называется «плодовым телом», это лишь небольшая часть организма. Большая часть его тела спрятана в дереве (или в земле), поедая древесину. Эта часть гриба называется мицелием. Чтобы культивировать белое нитчатое, щупальцевое, ризоматическое мицелиальное тело Schizophyllum Commune на чашке Петри, вы возьмете образец стебля, стерилизуете и поместите на свои чашки MEA. Мицелий вырастет из стерилизованного образца сердцевины стебля гриба и колонизирует чашку Петри, выглядя как белый хлопчатобумажный коврик.

Вам понадобиться:

• Чашки с агаром с солодовым экстрактом (MEA), приготовленные на предыдущем шаге.
• 70% изопропиловый спирт (медицинский спирт) и распылитель
• Бумажные полотенца
• Скальпель, или просто бритва из нержавейки - подойдет канцелярский нож
• пинцет по металлу
• перчатки
• Пламя - я использую спиртовую лампу для стерилизации инструментов, у NonDisjunction есть отличное руководство о том, как ее сделать.
• Стерильная поверхность для резки (я просто использовала для этого стерильную чашку Петри)
• Parafilm, парафиновая пленка, используемая для герметизации чашек Петри - вы также можете просто использовать малярную ленту, если у вас ее нет

СТЕРИЛЬНАЯ ТЕХНИКА:

Главное, о чем вы должны помнить, пытаясь использовать стерильную технику, - это то, что бактерии и споры постоянно падают в воздух, поэтому вы хотите, чтобы ваши чашки Петри были как можно больше закрыты. Когда вы поднимаете крышки для заливки питательной среды или инокуляции, всегда лучше держать крышку прямо над чашкой, позволяя получить доступ к внутренней части по горизонтали, но удерживая крышку над чашкой, чтобы предотвратить попадание бактерий внутрь. Во-вторых, вы представляют собой гигантский конгломерат человеческих, бактериальных, грибковых и других организмов ~~, хотя вы его не видите, вы окружены плотным облаком микробов, которые распространяются по вашему телу. Вместо того, чтобы просто сидеть на поверхности вашей кожи, ваш микробиом простирается в воздух ~~ sooooooo, никогда не махайте руками над чашкой Петри и не наклоняйтесь над открытой чашкой, чтобы заглянуть внутрь. И наденьте перчатки, если они у вас есть;)

НАСТРОЙТЕ СВОЕ ПОЛУСТЕРИЛЬНОЕ РАБОЧЕЕ МЕСТО

Выберите непористую рабочую поверхность, очищенную от мусора и мусора. Распылите на эту область 70% -ный раствор изопропилового спирта и вытрите бумажным полотенцем. Поместите пламя в центр рабочей зоны и зажгите его. Вам нужно работать как можно ближе к пламени, потому что это создает небольшое стерильное поле вокруг него. Поместите чашки MEA с одной стороны, а образец грибов на стерильную поверхность для резки с другой стороны. Обычно я использую стерильную чашку Петри в качестве стерильной режущей поверхности, а также в качестве подставки для инструмента. Налейте немного изопропилового спирта в небольшой стакан - вы будете использовать его для стерилизации лезвия и пинцета во время работы.

* ¡~ ПРИВИВАТЬ ~! *

Прежде чем что-либо делать, простерилизуйте лезвие и пинцет, погрузив их в изопропиловый спирт и немного подержав над пламенем. После стерилизации положите их на стерильную режущую поверхность, если вы их поставили. Пинцетом удерживайте грибовидную ножку и отрежьте от нее кусок. Возьмите этот кусок и разрежьте со всех сторон так, чтобы получился небольшой кубик сердцевины грибовидной ножки со всеми удаленными внешними поверхностями. Это помогает избавиться от всех других микробов, которые живут на грибе, и не загрязнять вашу культуру. Затем окуните сердцевину стебля в изопропил примерно на 30 секунд, вытащите и дайте высохнуть в стерильном поле пламени (не используйте пламя для сушки, это убьет гриб). Снова стерилизуйте пинцет пламенем, пока дожидаетесь высыхания стержня стержня. Затем просто поднимите крышку одной из пластин MEA ровно настолько, чтобы сдвинуть пинцет сбоку, и с помощью стерилизованного пинцета поместите стержень стержня в центр пластины. Закройте чашку парафильмом, и в течение следующих нескольких недель вы должны увидеть, как мицелий S. Commune колонизирует чашку.

Я обычно делаю несколько чашек при работе с дикими образцами, чтобы в случае заражения у меня с большей вероятностью была хотя бы одна чистая культура.